酒色网小说 丁香假单胞菌、丁香假单胞菌
丁香假单胞菌、丁香假单胞菌 NBRC14078冷冻干燥菌种的转接本事
冷落用下列要领还原培养冷冻干燥储藏的菌种。
-、安瓶管开封
1.用浸过70%乙醇的脱脂棉擦净安瓿管。
2.用火焰将安瓿管尖端加热。
3.滴无菌水至加热的安瓿管尖端使玻璃开裂。
4.用挫刀或镊子敲下已开裂的安瓿管的尖端。
二、菌株还原培养
1.用无菌吸管,吸取0.3~0.5ml顺应的液体培养基,滴东说念主安瓿管内,轻轻飞舞,使冻于菌体熔化呈悬浮状。
2.取0.1~0.2ml菌体悬浮液,移植于顺应的琼脂 斜面/平板培养基上,剩余的菌液,注入顺应的液体培养基内,然后在冷落的温度下培养。
3.若未能活化,或活化后有疑问时,请于收到菌种1个月内,告知储藏中心,经查证无误后,即免费补寄。
三、提防事项
1.菌种活化前,请将安瓿管保存在6一10℃的环境下。
2.厌氧菌的培养,如无超越讲解,自开封至接种完成,均需以无氧气体充填,以保握厌氧现象。
3.某些菌种经过冷冻干燥保存后,延伸期较长,需探究两次继代培养才能正常孕育,此时请将要领二(2)类似一次。
液氮超低温储藏圭臬
1、容器的采纳:使用带螺旋盖的2ml塑料安培瓶。
2、查验安培瓶是否渗漏:用0.05%的亚甲基蓝水溶液在4℃浸泡30-45分钟,冲洗干净,弃去含有蓝色染料的安培瓶,其余的安培瓶备用。
3、打印标签(激光打印)。
4、容器的灭菌:先用蒸馏水漂洗干净安培瓶,再用蒸馏水在灭菌锅中121℃浸泡灭菌15分钟,干燥并将打印好的标签放入安培瓶中,略拧紧螺旋盖酒色网小说,从头121℃灭菌30分钟。
5、储藏菌菌龄:处于最大孕育量阶段或对数孕育期后期。
6、保护剂:采用5-10%的甘油或二甲基亚砜 作保护剂。
1)甘油的准备:在121℃灭菌15分钟酒色网小说,2-8℃贮存。甘油一般以两倍最终所需浓度的水溶液保存酒色网小说,然后与同等量的细胞悬液羼杂。若无谓细胞悬液,则以最终所需浓度的水溶液保存。
2)二甲基亚砜:用0.22um的聚四氟乙烯过滤膜过滤除菌。过滤膜事前用甲醇和二甲基亚砜漂洗。无菌的二甲基亚砜以10-15ml装量2-8℃避光保存。
7、分装:在无菌条目下,将细胞悬液(从平板上打下直径为5cm的菌块)分装于安培瓶中,并注入保护剂,拧紧螺旋盖。
8、将安培瓶固定在铝夹上,贴好标签。为了便于取用,一般一个铝夹上仅放一个菌株。
9、将控温系统先预冷到4℃,再将铝夹放入其中。以每分钟1℃降温至-40℃,然后以每分钟10℃降温至-90℃。降温以后,将铝夹转动至处于液氮中的储存器中保存。
10、菌种的回生:将液氮储藏的菌种取出,速即放入37℃水浴中解冻。一般需2至2.5分钟,等十足解冻后,再实时转接到合适的培养基中培养。 丁香假单胞菌、丁香假单胞菌 NBRC14078斜面低温储藏法
(1)将菌种接种在顺应的固体斜面培养基上,待菌充分孕育后,棉塞部分用油纸包扎好,移至2-8℃的雪柜中储藏。
(2)储藏时辰依微生物的种类而有不同,霉菌、放线菌及有芽孢的细菌保存2-4个月,移种一次。酵母菌两个月,细菌最佳每月移种一次。
此法为履行室和工场菌种室常用的储藏法,优点是操作简短,使用方便,不需特等设立,能随时查验所储藏的菌株是否物化、变异与浑浊杂菌等。症结是容易变异,因为培养基的物理、化学特质不是严格恒定的,多次传代会使微生物的代谢编削,而影响微生物的性状;浑浊杂菌的契机亦较多。
2.液体石蜡储藏法
(1)将液体石蜡分装于三角烧瓶内,塞上棉塞,并用牛皮纸包扎,1.05kg/cm2,121.3℃灭菌30分钟,然后放在40℃温箱中,使水汽挥发掉,备用。
(2)将需要储藏的菌种,在最顺应的斜面培养基中培养,使获取健壮的菌体或孢子。
(3)用灭菌吸管吸取灭菌的液体石蜡,注入已长好菌的斜面上,其用量以逾越斜面尖端1cm为准,使菌种与空气隔绝。
(4)将试管站立,置低温或室温下保存(有的微生物在室温下比雪柜中保存的时辰还要长)。
此法实用而效力好。霉菌、放线菌、芽孢细菌可储藏2年以上不死,酵母菌可储藏1-2年,一般无芽孢细菌也可储藏1年掌握,以致用一般要领很难储藏的脑膜炎球菌,在37℃温箱内,亦可储藏3个月之久。此法的优点是制作简短,不需特等设立,且不需时时移种。
症结是保存时必须站立扬弃,所占位置较大,同期也未便佩戴。从液体石蜡底下取培养物移种后,接种环在火焰上烧灼时,培养物容易与残留的液体石蜡一齐飞溅,应超越提防。
3.滤纸储藏法
(1)将滤纸剪成0.5×1.2cm的小条,装入0.6×8cm的安瓿管中,每管1—2张,塞以棉塞,1.05kg/cm2,121.3℃灭菌30分钟。
(2)将需要保存的菌种,在顺应的斜面培养基上培养,使充分孕育。
(3)取灭菌脱脂牛乳1-2ml滴加在灭菌培养皿或试管内,取数环菌苔在牛乳内混匀,制成浓悬液。
(4)用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内,使其吸饱,再放回至安瓿管中,塞上棉塞。
(5)将安瓿管放入内有作吸水剂的干燥器中,用真空泵抽气至干。
(6)将棉花塞入管内,用火焰熔封,保存于低温下。
(7)需要使用菌种,回生培养时,可将安瓿管口在火焰上烧热,滴一滴冷水在烧热的部位,使玻璃打破,再用镊子敲掉口端的玻璃,待安瓿管开启后,取出滤纸,放入液体培养基内,置温箱中培养。
细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法储藏,前两者可储藏2年掌握,有些丝状真菌以致可储藏14-17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法便捷,不需要特等设立。
一、基快活趣
微生物具有容易变异的特质,因此,在储藏历程中,必须使微生物的代谢处于最不活跃或相对静止的现象,才能在一定的时辰内使其不发生变异而又保握生存才调。
低温、干燥和隔绝空气是使微生物代谢才调缩短的紧迫因素,是以,菌种储藏要领虽多,但齐是把柄这三个因素而策画的。
丁香假单胞菌、丁香假单胞菌 NBRC14078储藏要领
梗概可分为以下几种:
1. 传代培养储藏法
又有斜面培养、穿刺培养、疱肉培养基培养等(后者作储藏厌氧细菌用),培养后于4-6℃雪柜内保存。
2. 液体石蜡隐敝储藏法
是传代培养的变相要领,大约符合延长储藏时辰,它是在斜面培养物和穿刺培养物上头隐敝灭菌的液体石蜡,一方面可糜烂因培养基水分挥发而引起菌种物化,另一方面可窒碍氧气插足,以减轻代谢作用。
3. 载体储藏法
是将微生物吸附在符合的载体,如泥土、沙子、硅胶、滤纸上,此后进行干燥的储藏法,举例沙土储藏法和滤纸储藏法应用超越闲居。
4. 寄主储藏法
用于现在尚不可在东说念主工培养基上孕育的微生物,如病毒、立克次氏体、螺旋体等,它们必须在生存的动物、虫豸、鸡胚内感染并传代,此法超越于一般微生物的传代培养储藏法。病毒等微生物亦可用其他要领如液氮储藏法与冷冻干燥储藏法进行储藏。
5. 冷冻储藏法
可分低温雪柜(-20-30℃,-50-80℃)、干冰乙醇快速冻结(约-70℃)和液氮(-196℃)等储藏法。
6. 冷冻干燥储藏法
先使微生物在极低温度(-70℃掌握)下快速冷冻,然后在减压下愚弄升华舒坦撤回水分(真空干燥)。
有些要领如滤纸储藏法、液氮储藏法和冷冻干燥储藏法等均需使用保护剂来制备细胞悬液,以糜烂因冷冻或水分不停升华对细胞的损伤。保护性溶质可通过氢和离子键对水和细胞所产生的亲和力来剖释细胞因素的构型。保护剂有牛乳、血清、糖类、甘油、二甲亚砜等。
三、器材
细菌、酵母菌,放线菌和霉菌;
肉膏卵白胨斜面培养基,灭菌脱脂牛乳,灭菌水,化学纯的液体石蜡,甘油,河沙,瘦黄土或红土,冰块、食盐,干冰,95%乙醇,10%盐酸,无水氯化钙;
灭菌吸管,灭菌滴管,灭菌培养皿,管形安瓿管,泪滴形安瓿管(长颈球形底),40目与 100目筛子,油纸,滤纸条(0.5×1.2cm),干燥器,真空泵,真空压力表,喷灯,L形五通管,雪柜,低温雪柜(-30℃),液氮冷冻储藏器。
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